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                  CBA原理詳細介紹

                  Cytometric Bead Array(CBA),即細胞因子微球檢測技術。是一種基于流式細胞檢測系統的多重蛋白定量檢測方法,它能夠同時對單個樣品中的多個指標進行檢測。BD公司利用流式細胞儀可對熒光信號進行級數放大的特性,將受檢的可溶性因子附著于一些具有近似細胞直徑的微粒上,即可對受檢樣品中的各種可溶性因子進行檢測。 CBA的基本原理近似于ELISA的檢測,即利用微小、分散的顆粒捕獲液體待測物,并利用流式細胞儀檢測類似“三明治”的顆粒——待測物復合體所散發的熒光,從而測定待測物的數量。


                  詳細原理介紹

                  每個CBA微球大小一致,具有特定的熒光強度,包被有適用于特定分析(如其它抗體或者可溶性蛋白)的特異性捕獲抗體(Capture Antibody),提供了類似ELISA孔板的捕獲表面。當微球和待測樣品溶液混合后,微球上的特異性抗體就與樣品(血清、血漿或者細胞培養液)中相應的抗原或蛋白結合,然后加入熒光標記的檢測抗體,就會形成“三明治”夾心復合物。最后通過流式細胞儀對特異性目的蛋白進行檢測。CBA的每種微球攜帶有不同強度的紅色熒光,在流式細胞儀的FL3通道通過檢測微球熒光強度的差異對目的蛋白定性;檢測抗體帶有PE熒光素標記,在流式細胞儀的FL2通道檢測,通過檢測抗體的PE熒光強度定量目的蛋白。

                  CBA技術特點

                  CBA具有FCM的寬范圍熒光檢測特點,對樣本需求量更少,檢測更快速、更準確。下面我們介紹一下CBA主要的技術特點:

                  • ◇ 輕松實現多重檢測。最多可同時對一個樣本中的75個目的蛋白進行精確定量。
                  • ◇ 樣本需要量小。僅需要50μL溶液就可進行一次檢測。
                  • ◇ 更高的靈敏度。分析靈敏度高達2.8pg/mL。
                  • ◇ 更高的靈敏度、更寬的檢測范圍和更好的重復性。CBA技術使蛋白定量的分析靈敏度高達pg/ml級別,檢測范圍達0-5000pg/ml,所有分析只需一組標準曲線。根據抗體的熒光強度對目的蛋白定量,排除了ELISA反應中酶聯放大產生的假陽性。
                  • ◇ 檢測對象的靈活組合—BD CBA Flex Set。CBA kit是同時檢測試劑盒配好的6個指標,形式比較固定。為滿足不同客戶的實際需要和研究興趣,BD于2005年初推出了CBA Flex set。它改變了CBAkit的固定形式,成為自由組合、靈活搭配的“自助餐”。您可以根據需要組合不同的捕獲微球來檢測多個指標,最多能同時檢測75個指標。除了擁有CBA kit的優勢外,Flex Set還配有獨立的軟件分析系統(CBA Flex Set Analysis Software),并且可以在BD FACSArray Bioanalyzer上,直接用96孔和384孔板進行操作。CBA Flex set賦予研究者更靈活、更自由,更大的選擇空間,而且進一步豐富了CBA產品線。種類涉及免疫、細胞信號傳導、細胞凋亡等許多領域的蛋白定量分析。
                  • ◇ 操作簡單,省時省力。CBA技術采用芯片式集成測定,所有檢測只需一組標準曲線,就可計算出每種待測蛋白濃度;操作簡單,整個流程只需要3.5小時,對待測樣本可做實時分析,縮短檢測了時間,提高了檢測效率。
                  • ◇ 強大的軟件分析系統。BD CBA軟件具有強大的數據處理能力,直接將目標蛋白的檢測結果換算成標準濃度;除了為用戶提供待測物的計數結果外,還能提供可視輪廓或信號圖形以幫助用戶獲得更多的信息。有用于Macintosh和Microsoft系統兩種版本供您選擇。和傳統的液相蛋白定量技術相比,CBA技術是一種“多元”和“同步”的檢測技術。

                  革新的CBA技術與傳統的蛋白定量相比有下列優點:


                  流式CBA檢測技術

                  檢測指標

                  一個樣本同時做到多參數檢測

                  所需樣本量

                  樣本用量少于50ul

                  平臺

                  流式儀器,幾乎適用于所有流式儀器,操作方便,節省時間

                  實驗時間

                  不需要孵育過夜,流式細胞儀自動檢測,標準曲線自動測定,專用軟件自動計算

                  背景干擾

                  無酶-底物背景干擾

                  CBA檢測對象

                  血清、血漿、眼淚、房水、唾液、體腔灌洗液、細胞培養液上清、細胞裂解物等

                  CBA應用領域

                  Luminex Immunoglobulin Isotyping Assays能夠同時定量多至6種免疫球蛋白亞型。可以在細胞培養上清液、血清或血漿樣品中根據kappa鏈、lambda鏈對免疫球蛋白亞型定量,以及總的定量。

                  • 炎癥因子的水平的分析
                  • 腫瘤研究及腫瘤疾病的輔助診斷、療效和預后監測
                  • 凋亡相關蛋白分析
                  • 系統性紅斑狼瘡(SLE)和新生兒膿血癥等免疫疾病的監控
                  • 干細胞研究和干細胞治療監測
                  • 免疫學研究和免疫疾病的輔助診斷和監控
                  • 炎癥因子的水平的分析
                  • 感染疾病的研究及輔助診斷和療效評價
                  • 免疫功能監測
                  • 藥效評價,藥物研發、疫苗研究
                  • 細胞信號傳導中磷酸化蛋白、凋亡相關蛋白定量分析

                  1、CBA指標

                  目錄號 產品說明 檢測指標

                   557800

                   Non-human Primate Th1/Th2 Cytokine Kit

                   IL-2, IL-4, IL-5, IL-6,TNF, IFN-γ

                   560485

                   Mouse Th1/Th2/Th17 Cytokine Kit

                   IL-2, IL-4, IL-6, IFN-γ, TNF, IL-17A, IL-10

                   551287

                   Mouse Th1/Th2 Cytokine Kit

                   IL-2, IL-4, IL-5, IFN-γ,TNF

                   552364

                   Mouse Inflammation Kit

                   IL-6, IL-10, MCP-1, IFN-γ, TNF, IL-12p70

                   550026

                   Mouse Immunoglobulin Isotyping Kit

                   Heavy and light chain isotypes of mouse IgG1,  
                   IgG2a, IgG2b, IgG3, IgA, IgM, and IgE

                   560484

                   Human Th1/Th2/Th17 Kit

                   IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNF, IFN-γ, IL-17A

                   550749

                   Human Th1/Th2 Cytokine Kit

                   IL-2, IL-4, IL-5, IL-10, TNF, IFN-g

                   551809

                   Human Th1/Th2 Cytokine Kit II

                   IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNF, IFN-g

                   551811

                   Human Inflammatory Cytokine Kit

                   IL-8, IL-1β, IL-6, IL-10, TNF, IL-12p70

                   552990

                   Human Chemokine Kit

                   IL-8, RANTES, MIG, MCP-1, IP-10

                   561418

                   Human Anaphylatoxin Kit

                   C3A,C4A,C5A



                  2、CBA Flex Set 細胞因子檢測指標

                   Human Mouse

                  Rat

                   IFN-γ,INF-α
                   IL-1 α ,IL-1β,   
                   IL-2,IL-3,
                   IL-4 , IL-5, IL-6, IL-7,
                   IL-8, IL-9, IL-10,   
                   IL-11,IL-12, IL-12p70, 
                   IL-13,IL-17A, IL-21, 
                   IL-23p40
                   TNF,TNFRⅠ,TNFRⅡ
                   IP-10
                   I-TAC
                   MIG
                   MCP-1
                   MIP-1 α, MIP-1 β
                   Eotaxin
                   RANTES
                   CD54(ICAM-1)
                   CD62E,CD62P,CD62L
                   CD106(VCAM-1)
                   sCD40
                   sCD154

                   sCD121a,sCD121b
                   Soluble CD14
                   Basic FGF
                   VEGF
                   Angiogenin
                   G-CSF,GM-CSF
                   LIF
                   LT-α
                   OSM
                   Granzyme A, 
                   Granzyme B
                   Fas Ligand(FasL)
                   Fractalkine
                   IgA, IgG1, IgG2,  
                   IgG3,IgG4, IgM, 
                    Total IgG,

                   IFN- γ
                   IL-1 α ,IL-1β, IL-2,IL-3,
                   IL-4 , IL-5, IL-6, IL-9,
                   IL-10, IL-12, IL-12p70,
                   IL-13, IL-17A, IL-21, 
                   IL-23p40,
                   TNF
                   MIG
                   MCP-1
                   MIP-1 α, MIP-1 β
                   RANTES
                   KC
                   CD62E(E-Selectin),
                   CD62L(L-Selectin)
                   G-CSF,GM-CSF

                   IFN- γ
                   IL-1 α, IL-4 , IL-6,
                   IL-10
                   TNF

                  3、CBA Flex Set 信號轉導指標

                   Phospho Akt1(S473)

                   Phospho Akt2(S474)

                   Phospho BLNK (Y84)

                   Phospho p120 Catenin(Y228)

                   Phospho Btk (Y551)

                   Phospho MEK1/2(S222)

                   Phospho eNOS (S1177)

                   Phospho Paxillin(Y118)

                   Phospho ERK1/2 (T202/Y204)

                   Phospho Pyk2(Y402)

                   Phospho Itk (Y511)

                   Phospho SLP-76(Y145)

                   Phospho JNK1/2 (T183/Y185)

                   Phospho c-jun(S63)

                   Phospho p38 (T180/Y182)

                   Phospho stat3

                   Phospho PLCg (Y783)

                   Total Stat1

                   Phospho Rsk (T573)

                   Total Syk

                   Phospho Stat1 (Y701)

                   Total ZAP70

                   Phospho Syk (Y352)

                   Phospho ZAP70 (Y319)



                  4、CBA Flex Set 干細胞指標

                   Human Rex-1 Flex Set

                   Human Nanog Flex Set

                   Human Oct-4 Flex Set

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